【法规名称】
【颁布部门】 国家食品药品监督管理局(原国家药品监督管理局)
【发文字号】 国食药监许[2011]96号
【颁布时间】 2011-02-21
【实施时间】 2011-02-21
【效力属性】 有效
【法规编号】 546532 什么是编号？
【正 文】
化妆品中6-甲基香豆素的检测方法
|
高效液相色谱法 1 范围 本方法规定了用高效液相色谱法测定化妆品中6-甲基香豆素的含量。 本方法适用于膏霜、乳、液、粉类化妆品中6-甲基香豆素的测定。 暂无实验数据表明本方式适用于蜡质类化妆品中6-甲基香豆素含量的测定。 2 方法提要 样品在经过提取后，经高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。必要时，采用气相色谱-质谱（gc/ms）进行确证。本方法对6-甲基香豆素的检出限为0.00005µg，定量下限为0.00017µg。若取1g样品，本方法对6-甲基香豆素的检出浓度为0.000005%，最低定量浓度为0.000017%。 3 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为超纯水。 3.1 甲醇：色谱纯。 3.2 6-甲基香豆素，纯度≥99.0%。 3.3 磷酸二氢钠 3.4 磷酸二氢钠缓冲溶液[c（nah2po4）=0.02mol/l，ph =3.5）：称取3.12g磷酸二氢钠，加水溶解并稀释至1000ml，磷酸调ph值至3.5。 3.5 6-甲基香豆素标准储备溶液[ （6-甲基香豆素）=1.0g/l）]：精密称取6-甲基香豆素0.1000g于100 ml容量瓶中，加甲醇（3.1）溶解并稀释至刻度，即得标准储备溶液（浓度为1g/l）。 3.6 系列浓度6-甲基香豆素标准溶液：精密量取标准储备溶液（3.5）5ml置于50ml量瓶中，即得100μg/ ml的标准溶液，再分别精密量取0.1 ml，0.5 ml，1.0 ml，3.0 ml，5.0 ml，10 ml于100ml的量瓶中，加甲醇（3.1）溶解并稀释至刻度。即得浓度分别为0.1μg/ ml、0.5μg/ ml、1.0μg/ ml、3.0μg/ ml、5.0μg/ ml、10.0μg/ ml的标准溶液。 4 仪器 4.1 高效液相色谱仪：具紫外检测器。 4.2 气相色谱-质谱仪。 4.3 分析天平：感量为0.01g。 4.4 分析天平：感量为0.00001g。 4.5 容量瓶：10ml、100ml。 4.6 具塞刻度离心试管：10ml。 4.7 涡旋振荡器。 4.8 超声波清洗仪。 4.9 离心机：转速不小于5000r/min。 5 测定步骤 5.1 样品处理 称取1.0g（精确至0.01g）样品于10ml容量瓶中，加入5ml甲醇（3.1），涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20min，冷却至室温后，用甲醇（3.1）稀释至刻度，混匀后转移至10ml刻度离心管中，以5000r/min离心5min。上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为样品溶液备用。若样品中6-甲基香豆素的浓度超过了线性范围的上限，需对待测液进行适当稀释。 5.2 色谱条件 a）色谱柱：c18柱（ 250mm×4.6mm，5μm，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂）； b）流动相：甲醇-磷酸二氢钠缓冲溶液（3.4）； 梯度洗脱参考条件见下表：
注：梯度洗脱条件，操作者可根据样品的不同选择最佳条件，使6-甲基香豆素与其他组分峰获得完全分离。 c） 流速：1ml/min； d） 检测波长：275nm； e） 柱温：35℃； f）进样量：10µl。 5.3 测定 按“5.2”项下色谱条件，取系列浓度的标准溶液（3.6）分别进样，进行高效液相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取“5.1” 项下样品溶液进样10μl，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算6-甲基香豆素的浓度。按“6”项下计算公式计算样品中6-甲基香豆素的含量。 6-甲基香豆素标准溶液高效液相色谱图参见附录a的图a.1。 5.4 阳性结果确证 必要时，采用气相色谱-质谱确证阳性检测结果，以检查化妆品中是否有其它物质干扰6-甲基香豆素的测定。如果检出的色谱峰的保留时间与标准品一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，且所选择的离子的相对丰度比与标准物质相一致，则可判断样品中存在6-甲基香豆素。 气相色谱-质谱（gc/ms）参考条件： a）色谱柱：hp-5ms 毛细管柱（30m×0.32mm×0.25µm，5%-苯基-甲基聚硅氧烷）或相当者； b）柱温程序：初始温度100℃，保持3min，后以8℃/min 的速率升至 200℃，保持 3min； c）进样口温度：250℃； d） 接口温度：280℃； e）载气：氦气1.0 ml/min； f）电离方式：ei； g）电离能量：70ev； h）监测方式：全扫描； i）监视离子范围（m/z）：40～200； j） 进样方式：不分流进样； k） 进样量：1.0µl。 6-甲基香豆素的全扫描图参见附录c的图c.1；质谱图参见附录c的图c.2。 6 计算（略） 7 回收率 当样品添加标准溶液浓度在0.001%～0.005%范围内，测定结果的平均回收率在92.2%～103.5%。 |
- 此法规有错误，我来纠正。请点击在此 提交错误内容或者您纠正的内容！