第5页 农业部关于印发《2012年动物源细菌耐药性监测计划》的通知
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[接上页] 5.2.2.1 pcr反应体系 根据不同厂家pcr试剂用量，配制pcr反应体系。同时设立阴性和阳性对照。 5.2.2.2 pcr反应条件 采用的pcr反应条件见下表。 pcr反应程序表
5.2.2.3 电泳 5.2.2.3.1 1.0%琼脂糖凝胶板的制备 称取1.0g琼脂糖，加入100ml0.5×tbe缓冲液（或1×tae缓冲液）中。加热融化后加5μl（10mg/ml）溴化乙锭，混匀后倒入放置在水平台面上的凝胶盘中，胶板厚5mm左右。依据样品数选用适宜的梳子。待凝胶冷却凝固后拔出梳子（胶中形成加样孔），放入电泳槽中，加0.5×tbe缓冲液（或1×tae缓冲液）淹没胶面。 5.2.2.3.2 加样 取10µlpcr扩增产物和3µl上样缓冲液混匀后加入一个加样孔。每次电泳加阳性对照和阴性对照的扩增产物各1孔作为对照。 5.2.2.3.3 电泳条件 电压110v，电泳时间40min。 5.2.2.4 结果判定 电泳结束后，取出凝胶板置于紫外投射仪上打开紫外灯观察或用凝胶成像仪进行成像分析。 如果某一待检样品扩增产物的条带与空肠弯曲菌阳性对照的条带在一条直线上，即它们与加样孔的距离相同，则该样品分离到的菌株可判定为空肠弯曲杆菌。 必要时，可以通过测序来进一步确证。 附录5：耐药性检测结果统计表 （1）大肠杆菌和沙门氏菌耐药性检测结果统计表 养殖场： 检测员： 年 月 日
注：直接填写检测的mic数值。 （2）金葡菌耐药性检测结果统计表 养殖场： 检测员： 年 月 日
注：直接填写检测的mic数值。 （3）弯曲杆菌耐药性检测结果统计表 养殖场： 检测员： 年 月 日
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