【法规名称】
【颁布部门】 农业部
【发文字号】 农业部公告第1779号
【颁布时间】 2012-06-04
【实施时间】 2012-06-04
【效力属性】 有效
【法规编号】 585542 什么是编号？
【正 文】
第2页 农业部公告第1779号――关于批准北京市农林科学院等11家单位申报的兽药的公告
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[接上页] 免疫攻毒法 用3～5周龄spf鸡15只，其中10只各颈部皮下或肌肉注射疫苗0.3m1，另5只作对照。接种后21～28日，用1∶10稀释的h9亚型aiv wd株毒种进行翅静脉注射，每只鸡0.5m1。攻毒后第5日，分别采集每只鸡的泄殖腔及气管拭子，将同一只鸡的泄殖腔及气管拭子混合后作为1个样品，每个样品经尿囊腔接种9～11日龄spf鸡胚5枚，每胚0.2ml，孵育观察5日，逐胚测定鸡胚液的ha效价。每个样品接种的5枚鸡胚中只要有1枚鸡胚的鸡胚液ha效价不低于1∶16（微量法），即可判为病毒分离阳性。对病毒分离阴性的样品，应盲传1次后再进行判定。免疫组鸡应至少有9只病毒分离阴性，对照组鸡应至少有4只病毒分离阳性。 【甲醛、汞类防腐剂残留量测定】 按现行《中国兽药典》附录进行测定，应符合规定。 【规格】 （1）100ml/瓶 （2）250ml/瓶 （3）500ml/瓶 【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为18个月。 附注 1 鸡传染性支气管炎血凝抑制试验（hi）抗原质量标准 本品系用鸡传染性支气管炎病毒（ibv）m41株接种易感鸡胚培养，收获感染胚液，经超速离心浓缩后，经a型魏氏梭菌滤液处理制成。用于检测鸡传染性支气管炎病毒抗体。 【性状】 白色混浊液体，底部有少量沉淀。 【装量检查】 按现行《中国兽药典》附录进行检验，应符合规定。 【特异性检验】 将ib、nd、ai（h9亚型）、eds、ibd阳性血清及spf鸡血清按附注2.3.1项处理后，与本抗原进行血凝抑制试验。ib阳性血清hi抗体效价应不低于1：128，nd、ai（h9亚型）、eds、ibd阳性血清及spf鸡血清hi抗体效价均应不高于1：8。 【效价测定】 按附注2.2.1项测定ha效价，应不低于1：128。 【作用与用途】 用于检测鸡传染性支气管炎病毒抗体的血凝抑制试验。 【注意事项】 使用时应将抗原充分摇匀。 【规格】 1ml/瓶 【贮藏与有效期】 -20℃以下保存，有效期为18个月。 2 鸡传染性支气管炎hi试验操作术式 2.1 试验材料 2.1.1 ib hi抗原 系用ibv m41株病毒液经100倍浓缩后加入a型魏氏梭菌滤液处理制成。 2.1.2 试剂 2.1.2.1 ha缓冲液 将5.96g hepes、8.19g氯化钠、0.15g氯化钙依次溶解纯化水中至1000ml，用0.1mol/l氢氧化钠溶液或盐酸溶液调至ph值6.5，用0.2mm微孔滤器滤过，分装，置2～8℃保存备用。 2.1.2.2 生理盐水 取9g氯化钠溶解纯化水中至1000ml。 2.1.2.3 红细胞悬液 采集公鸡血液（加入阿氏液抗凝），加入生理盐水，离心，洗涤5次，最后用ha缓冲液将血球泥稀释至1%（v/v）。 2.1.2.4 25%高岭土悬液 取高岭土25g，加纯化水至100ml，再加入0.1mol/l盐酸溶液 250ml，摇匀，静置60分钟，弃上清，用注射用水反复洗涤至中性，置37℃，直至水份完全蒸发，用pbs（0.01mol/l，ph值7.2）配成25%悬液，置2～8℃保存备用。 2.2 ib hi工作抗原的制备 2.2.1 ib hi抗原效价测定 2.2.1.1 在96孔微量板上，从第1孔至第12孔，用加液器每孔加入ha缓冲液25ml。 2.2.1.2 取25mlhi抗原，从第1孔起，依次作2倍系列稀释至第12孔，混合，弃去25ml。 2.2.1.3 每孔加入25ml ha缓冲液。 2.2.1.4 每孔加入25ml 1%鸡红细胞悬液，每块板上设稀释液和红细胞悬液对照孔。 2.2.1.5 将微量板置振荡器上振荡30秒，置2～8℃作用45分钟，判定结果。判定时，将微量板倾斜45度。对照孔的红细胞完全沉淀到孔底中心，呈泪珠样流淌，ha阳性孔的红细胞则均匀分布于孔底或呈锯齿样凝集。使红细胞完全凝集的最大稀释倍数为该抗原的ha效价。 2.2.2 ib hi工作抗原的配制 如果ib hi抗原凝集价测定结果为1：1024（举例），则4个ha单位为1：256（1024÷4=256），这时可将hi抗原用ha缓冲液稀释256倍，即成4 ha单位的工作抗原液。 2.3 hi试验操作方法 2.3.1 待检血清的处理 取0.1ml血清，加入0.3ml 25%高岭土悬液，混匀，置37℃ 60分钟，以6000r/min离心15分钟，取上清，即为1：4稀释的待检血清。 2.3.2 hi试验操作方法 2.3.2.1 在96孔微量板上，每行从第2孔开始，每孔加入25mlha缓冲液，直至第12孔。 2.3.2.2 分别在第1、2、12孔中加入处理过的待检血清25ml。 2.3.2.3 用加样器从第2孔起作2倍系列稀释，直至第10孔（血清稀释倍数从第1孔的1：4、第2孔的1：8……至第10孔的1：2048），弃去25ml。 2.3.2.4 向第1～11孔中加入25ml 4 ha单位的抗原，在微量振荡器上振荡30秒，室温下作用30分钟。 2.3.2.5 每孔加入25ml红细胞悬液，振荡30秒，放2～8℃下反应30～45分钟，判定结果。 |
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