【法规名称】
【颁布部门】 农业部
【发文字号】 农业部公告第1785号
【颁布时间】 2012-06-11
【实施时间】 2012-06-11
【效力属性】 有效
【法规编号】 584836 什么是编号？
【正 文】
第2页 农业部公告第1785号――关于批准中国兽医药品监察所等单位的新兽药并核发《新兽药注册证书》的公告
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[接上页] 1.1.2 灭活与灭活检验 按菌液总量的0.3%比例缓慢加入10%甲醛溶液，经37℃灭活24～48小时，灭活期间每隔4～6小时搅拌一次。取样分别接种含1%裂解血球全血的马丁肉汤和含10%犊牛血清的巧克力琼脂平板，37℃培养24小时，应无菌生长。 1.1.3 离心洗涤 将灭活菌液进行离心（3000～5000rpm）20分钟，用生理盐水洗3次，最后一次的菌悬液进行适当稀释，用标准的细菌浊度管进行比对，根据含菌总数（cfu/ml）=稀释倍数×7.0×108cfu/ml，计算菌悬液中的含菌总数（cfu/ml）。 1.1.4 平板凝集试验用抗原的配制 根据菌悬液中的含菌总数，用灭菌生理盐水将菌悬液稀释成每ml含菌数1.0×109cfu，即为平板凝集试验用抗原。 1.1.5 平板凝集试验用抗原的检验 采用玻片凝集试验进行，将鸭疫里默氏菌菌体抗原滴加于干净玻片上，然后再滴加1滴1型鸭疫里默氏菌阳性血清（血清效价≥1：32），用接种环将抗原和血清充分混合，2分钟观察结果，如出现清晰的乳白絮状凝集，即判合格，同时设置生理盐水对照，应无凝集发生。 1.2 大肠杆菌平板凝集试验用抗原制备 1.2.1 菌液制备 将冻干的大肠杆菌bz株（血清型o78）接种于马丁肉汤，37℃培养24小时，然后划线接种麦康凯琼脂平板，37℃培养24小时，选择粉红色或砖红色、菌落隆起、表面光滑、边缘整齐的菌落，接种普通琼脂斜面，37℃培养24小时，用生理盐水将琼脂斜面上的菌苔洗涤下来，装入分装瓶中。 1.2.2 高压灭活 将洗涤下来的菌液置高压锅进行灭活，120℃高压2小时。 1.2.3 灭活菌悬液中菌数的确定 用灭菌生理盐水对灭活后的菌液进行适当稀释，用标准的细菌浊度管进行比对，根据含菌总数（cfu/ml）=稀释倍数×8.0×108cfu/ml，计算灭活菌液中的含菌总数（cfu/ml）。 1.2.4 平板凝集试验用抗原的配制 根据灭活菌液中的含菌总数，用生理盐水将菌悬液稀释至每ml含菌数1.0×1010cfu，即为平板凝集试验用抗原。 1.2.5 平板凝集试验用抗原的检验 采用玻片凝集试验进行，将大肠杆菌菌体抗原滴加于干净玻片上，然后再滴加1滴大肠杆菌o78血清型因子阳性血清（血清效价≥1：640），用接种环将抗原和血清充分混合，2分钟后观察结果，如出现清晰的乳白絮状凝集，即判合格，同时设置生理盐水对照，应无凝集发生。 1.3 鸭疫里默氏菌阳性血清制备 1.3.1 免疫抗原的制备 将鸭疫里默氏菌进行纯培养，对培养物进行计数后灭活，备用。将弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂在研钵中研磨均匀，然后再边磨边加入等体积的灭活鸭疫里默氏菌菌液，直至成为均匀的乳白色油状液体。免疫原中鸭疫里默氏菌菌体含量为1.0×1010cfu/ml。 1.3.2 免疫动物 取2.0～3.0kg spf鸡6只，免疫前每只采血检测1型鸭疫里默氏菌抗体和o78大肠杆菌抗体均为阴性，继续饲养观察7日，无异常情况即可用于阳性血清制备。 1.3.3 免疫程序 首免后第7日、14日和21日进行二、三和四免，免疫部位为胸、腿部皮下多点注射，每次免疫剂量为1ml/只，四免后10日，每只静脉注射纯菌体抗原1ml（含菌数1.0×1010cfu），免疫后14日采血测抗体。 1.3.4 血清抗体效价测定 用凝集试验进行测定，当抗原对照成立时，以出现50%凝集的血清最高稀释度的下一倍比稀释度为待检血清效价，血清凝集效价≥1：32为合格。 2 试管（或微量）凝集试验检测鸭疫里默氏菌抗体效价的测定 2.1 试管（或微量）凝集试验用抗原 制备方法同平板凝集用抗原，使用前用灭菌生理盐水将菌悬液稀释成每ml含菌数2.0×108cfu，即为试管（或微量）凝集试验用抗原。 2.2 操作方法 用0.5%石碳酸生理盐水将待检血清作2倍系列稀释，每稀释度各取0.5ml加入小玻璃试管或100ul加入u型反应板，每一管或孔加入等量的鸭疫里默氏杆菌试管凝集试验用抗原0.5ml或100ul，充分混匀后，置37℃培养箱作用16～24小时，观察结果，同时设抗原对照。当抗原对照成立时，以出现50%凝集的血清最高稀释度的下一倍比稀释度为待检血清效价。 3 鸭传染性浆膜炎的发病判定标准 3.1 出现精神不振、行动蹒跚、眼鼻有分泌物流出、排绿色或黄绿色稀薄粪便、角弓反张等鸭传染性浆膜炎临床症状或死亡的，判为发病。 3.2 对无临床症状的鸭应剖检观察病变，若出现心包膜炎或肝周炎或浆膜炎病变，判为发病。 4 试管（或微量）凝集试验检测抗血清型o78大肠杆菌抗体效价的测定 |
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