【法规名称】
【颁布部门】 卫生部
【发文字号】 卫疾控结防便函[2010]36号
【颁布时间】 2010-04-13
【实施时间】 2010-04-13
【效力属性】 有效
【法规编号】 475647 什么是编号？
【正 文】
第19页 卫生部疾控局关于印发《全国第五次结核病流行病学抽样调查实施细则》的通知
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[接上页] 所有痰涂片受检者均应进行结核分枝杆菌培养。培养实验室由流调队协调在具备实验条件的实验室进行。如果县（区）和地（市）级实验室人员不具备培养能力，由省级参比室下派实验员进行结核分枝杆菌培养。 （一）标本选择 1. 3份痰标本均为阳性：选取阳性级别高的2份痰标本进行培养； 2.3份痰标本2份阳性：选取2份阳性痰标本进行培养； 3. 3份痰标本1份阳性：选取阳性标本和1份质量好的阴性标本进行培养； 4. 3份标本均为阴性：选取标本性状好的2份痰标本进行培养； 5. 3份标本均为阴性且性状大致相同：选取晨痰和夜间痰进行培养。 应按照国家标本运送相关规定，拟进行培养的标本在留取后6天之内冷链运输至培养实验室，在留取后7天内必须进行结核分枝杆菌培养。 （二）痰分离培养 应使用省参比室统一提供的酸性改良罗氏培养基，本次调查采用氢氧化钠处理直接接种酸性罗氏培养基方法（简单法）。 1. 设备材料 （1）II级生物安全柜 （2）恒温培养箱 （3）涡旋振荡器 （4）前处理管 （5）无菌吸管（每份标本需要一支吸管） （6）试管架 （7）废液缸（内盛不腐蚀高压灭菌器的消毒液或水） （8）废弃物袋 2. 试剂 （1）4%氢氧化钠（NaOH）溶液 （2）酸性改良罗氏培养基 3. 环境、设备、材料准备 （1）将酸性罗氏培养基从冷藏环境中取出，室温下放置； （2）接通生物安全柜电源，预热3分钟； （3）将患者姓名标记在前处理管上； （4）待酸性罗氏培养基恢复至室温，在培养管斜面的背面标记患者姓名、实验序号、接种日期。 4. 操作步骤 （1）对照标记的姓名，在生物安全柜内将约2ml标本置于相应前处理管中； （2）旋紧痰标本容器螺旋盖； （3）使用吸管，将与痰标本等体积4% NaOH加入前处理管中； （4）旋紧处理管螺旋盖，将处理管置于试管架内； （5）接通涡旋振荡器电源，将处理管在涡旋振荡器上涡旋震荡30秒左右； （6）将前处理管置于试管架内，置于生物安全柜内，室温静置15分钟； （7）拧开罗氏培养管螺旋盖，检查培养基斜面底部的凝固水，如果凝固水过多，则沿着斜面相对的一面的培养管内壁，将凝固水弃去； （8）以无菌吸管吸取前处理后的痰标本，吸取接近结束时，将吸管口移出液面，继续松开吸管气泡端，使吸管前端一段不含液体，以减少液体意外滴落的风险； （9）保持培养基斜面水平或底端略低，接种时第一滴液体接种至斜面中部，第二滴接种到培养基上部；每支培养基使用接种0.1－0.15ml（约2滴）； （10）将用过的吸管置于废液缸内； （11）旋上培养管螺旋盖，不要太紧； （12）轻轻转动并放低培养管底部，使接种的液体均匀的在斜面上铺开； （13）将培养基放置在斜面放置架上，保持培养基斜面水平向上； （14）重复步骤8－步骤13，直至全部培养基接种完毕； （15）连同斜面放置架将培养基置于恒温培养箱内，36±1℃孵育； （16）24小时后，拧紧培养管螺旋盖，直立放置，36±1℃条件下继续孵育。 5. 登记与报告 （1）接种后第3和7日观察培养情况，此后每周观察一次，直至第八周末。如果第3日或第7日发现有污染，应嘱受检人重新留痰进行培养。每次观察后要在培养结果记录本上记录观察结果。 （2）肉眼判定：结核分枝杆菌的典型菌落形态为：不透明淡黄色、粗糙、干燥、凸起于培养基、有的成菜花样。如果发现培养基液化、或者长霉菌，则报告污染（登记本标记“C”）。 （3）根据肉眼的初步判定，按以下生长情况记录结果： 无菌落生长报告培养阴性，标记“-” 菌落生长不及斜面面积1/4时报告实际菌落数 菌落占斜面面积 1/4报告（1＋） 菌落占斜面面积 1/2报告（2＋） 菌落占斜面面积 3/4报告（3＋） 菌落布满培养基斜面报告（4＋） 污染报告“C” 培养登记本样式见附件，调查结束后，培养结果登记本复印件应上交国家参比室。 所得全部分离株应4℃妥为保存，并尽快进行菌株运送。国家参比室经次代培养后进行药物敏感性测定，并以鉴别培养基作分枝杆菌种初步鉴定。 五、药物敏感性测定 （一）所有分枝杆菌分离株应作抗结核药物敏感性测定。 （二）药物敏感性测定采取比例法，药物敏感性测定所用培养基采用无淀粉改良罗氏鸡卵培养基，经蒸汽凝固器85℃蒸汽凝固50分钟。 （三）作药物敏感性测定的抗结核药物应避光、密闭、干燥、-20℃保存。根据药物的生物效价折算后准确称重。 |
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