【法规名称】
【颁布部门】 卫生部
【发文字号】 卫疾控结防便函[2010]36号
【颁布时间】 2010-04-13
【实施时间】 2010-04-13
【效力属性】 有效
【法规编号】 475647 什么是编号？
【正 文】
第21页 卫生部疾控局关于印发《全国第五次结核病流行病学抽样调查实施细则》的通知
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[接上页] （三）药物敏感性试验的质量保证 1. 为避免不同实验室之间的药物敏感性试验结果差异，本次调查中的药敏试验由国家结核病参比实验室承担。 2. 固定经过培训且熟练度测试结果合格的实验员进行药物敏感性试验。 3. 含药培养基在有效期内使用。 4. 每批含药培养基以结核分枝杆菌H37Rv为对照。 5. 为保证试验质量和实验员安全，药物敏感性试验每人每天不超过20株。 6. 菌株送至国家参比室时，均应进行二次传代，待3－4周后进行药物敏感性测定。 7. 培养箱温度的保障：培养箱的温度应在35℃-37℃之间。 8. 全部药敏试验结束后，随机抽取10%菌株进行复验。 （四）菌株运送 1. 菌株运送前 各流调点分离到阳性培养物后，及时从36℃培养箱转移到4℃暂时保存，并尽快报告省参比实验室。省参比实验室到流调点核对实验室分离培养结果记录本与培养管，准确填写菌株运送标签与菌株运送表，与阳性培养物一同送到国家结核病参比实验室，运送前要暂时保存于4℃。 2. 菌株运送 菌株运送由省级参比实验室承担，运送时要使用符合相关规定的专用菌株运送箱，必要时（运送环境温度可能高于36℃时）在运送箱内放入制冷剂，并遵守卫生部《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》，由经过专门培训的有菌株运输资质的人员进行运送。 3. 菌株运送后 阳性分离培养物由流调点运输到省参比室后，若不能立即运送到国家参比室，应在生物安全柜内打开菌株运输箱，将培养物放置于4℃冰箱暂时保存。培养物送到国家参比室后，同样在生物安全柜内打开菌株运输箱，观察有无泄漏发生，尽快传代培养进行药物敏感性试验。 十、实验室设备耗材要求 （一）涂片设备耗材要求 设备、耗材的技术要求见《中国结核病防治规划－痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》，由省级统一提供。 （二）培养设备耗材要求 设备要求参见《全国结核病耐药性基线调查实施手册》附件中“各调查点主要设备技术参数”内容。 培养基要求 酸性改良罗氏培养基由省级统一提供，使用省级参比室制备的或者获得药监局批准的商业化培养基。酸性改良罗氏培养基制备程序如下： 1．试剂与含量 按下表所列的各组份比例，准备所需试剂。制备培养基所需化学试剂应使用分析纯纯度。另准备70－75％酒精约200毫升用于鸡蛋表面消毒。 改良罗氏培养基组分与含量（以配制一个全量培养基为例） 成份 酸性改良LJ 无机盐成分 磷酸二氢钾（KH2PO4） 14g 硫酸镁（MgSO4 ·7H20） 0.24 g 枸橼酸镁Magnesium citrate 0.6 g L-天冬酰胺（L-Asparagine）或谷氨酸钠（Sodium glutamate） 3.6 g/7.2 g 丙三醇（Glycerol） 7.2 g 蒸馏水 600 ml 鸡蛋匀液 1000 ml 孔雀绿Malachite green （2%） 20 ml 孔雀绿水溶液配制方法：称取孔雀绿染料2g，加蒸馏水或去离子水至100 ml使用无菌技术溶解染料于灭菌的蒸馏水或无菌去离子水中（放置于37°C温箱中1-2小时）或者在水浴中加热。配制好的溶液储存于深色瓶中。此溶液长时间放置并不稳定，如果发生沉淀，应丢弃并重新配制。 2．培养基制备准备 （1）盐溶液 将称取的无机盐置于已高压灭菌的2000ml烧瓶中，加入600ml 去离子水制备成盐溶液。沸水浴或煮沸30分钟，也可进行121°C灭菌15分钟。 （2）用肥皂水清洁鸡蛋，然后流水冲洗后，用70%酒精擦洗消毒，晾干。 3．培养基制备 （1）将消毒晾干的新鲜鸡蛋打入灭菌的容器内，使用打蛋器或搅拌器进行匀化； （2）用无菌的2层纱布过滤匀化的鸡蛋液； （3）量取需要的体积（1个全量为1000ml）鸡蛋液加到盐溶液中； （4）加入2％孔雀绿溶液20ml，缓慢混合； （5）分装培养液至培养管中，每管约7 ml； （6）将培养管放在斜面架上，使培养基斜面占试管长度2/3，放在已预热的蒸汽凝固器中，待凝固器温度升至85°C，开始计时，凝固50分钟； （7）将试管从蒸汽凝固器中取出，冷却至室温时旋紧螺旋盖； （8）根据培养基质量控制的要求检查外观，合格的培养基则进行下一步操作。 4．无菌测试 （1）抽取5％的培养基，置于恒温培养箱内，36＋1°C孵育； （2）48小时后观察是否有细菌生长； （3）如果测试的任何一支培养基未发现有培养物生长，即为无菌测试合格； （4）如果测试的任何一支培养基有培养物生长，则将同一批次的所有培养基置于36＋1°C孵育48小时，逐一检查培养基，弃去有细菌生长的培养管，没有培养物生长的培养管保存备用； |
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